組織細胞內抗原的固定是免疫酶標和非標記免疫酶組織化學方法中的重要環節。經過固定,可以達到如下目的:1.標本在玻片上的吸著力增加;2.標本所含的類脂和蠟質等成分可以除去,從而有利于抗原與酶標記抗體的結合;3.標本的保存時間可以增長,組織切片固定后,在-20℃,可以存放一年以上而不改變免疫酶技術的染色;組織內有關抗原不同,則所用固定劑與固定方法也隨之改變。
丙酮和乙醇是常用的兩種固定劑。但對于許多病毒與細菌的定位研究,選擇丙酮和四氯化化碳作為固定劑是zui合適的;對于可溶性蛋白抗原的定位,常用乙醇;對于多糖,則用8%-10%福爾馬林,而不用乙醇與丙酮等有機溶劑。
對于植物病毒材料的固定,丙酮用得zui多,乙醇次之。因為丙酮對病毒的抗原性損害為zui小,但對于那些不穩定的病毒,則應避免固定。
在應用免疫酶技術時,固定處理對酶的活性的影響也得心中有數。許多固定劑對抗原的活性都 會有所損害,例如,福爾馬林對蛋白抗原的固定造成抗原性的破壞非常明顯。因此,對福爾馬林的使用必須嚴格控制濃度,一般使用的福爾馬林濃度為10%,盡管如此,對抗原的抗原性還是有損害,所以必須進行抗原修復。